昨日，中國(guó)疾控中心病毒病所國(guó)家流感中心實(shí)驗(yàn)室，工作人員正在提取病毒標(biāo)本中的核酸液。

工作人員正在分析病毒標(biāo)本。

　　                                        對(duì)甲型H1N1檢測(cè)結(jié)果起至關(guān)重要作用的凝膠成像分析系統(tǒng)ZF-258型
      
      對(duì)于疑似甲型H1N1流感患者，通過(guò)何種手段才能終確診其感染了甲型H1N1流感病毒？

　　昨日下午，北京市宣武區(qū)迎新街100號(hào)，記者實(shí)地探訪(fǎng)了中國(guó)疾控中心病毒病所國(guó)家流感中心實(shí)驗(yàn)室，工作人員再現(xiàn)了如何從疑似患者呼吸道內(nèi)獲取標(biāo)本并分離出病毒的基本片段，再通過(guò)特殊儀器下讀出病毒的基因序列，終與甲型H1N1流感病毒的基因序列圖進(jìn)行比照，從而得出患者是否染疫的全過(guò)程。

　　1　運(yùn)送

　　4℃恒溫運(yùn)送病毒標(biāo)本

　　地點(diǎn)：醫(yī)院至流感網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室

　　用于追索病毒的標(biāo)本來(lái)自疑似患者的呼吸道，一般是液體，即喉液或鼻液。每份液體標(biāo)本需求量為200微克以上。

　　據(jù)國(guó)家流感實(shí)驗(yàn)室工作人員李曉丹介紹，只有足夠的標(biāo)本量，才能保證分離到足夠的活病毒和用于核酸檢測(cè)的病毒基因片段。

　　為了保證病毒的活性，每份標(biāo)本從患者的鼻部或咽部取出后，必須立即裝進(jìn)防漏、防爆、防雨的特殊密閉容器中。

　　李曉丹說(shuō)，容器內(nèi)，要保證4攝氏度的恒溫，“就像冰箱冷藏室”，一直從醫(yī)院堅(jiān)持到實(shí)驗(yàn)室。之后，經(jīng)專(zhuān)人送進(jìn)重重機(jī)關(guān)的P3實(shí)驗(yàn)室（生物防護(hù)三級(jí)實(shí)驗(yàn)室）。上海嘉鵬產(chǎn)凝膠成像儀對(duì)檢測(cè)甲型H1N1至關(guān)重要www.623959.com

　　2　提取

　　提取病毒分裝基因片段

　　地點(diǎn)：生物防護(hù)三級(jí)實(shí)驗(yàn)室

　　P3實(shí)驗(yàn)室曾經(jīng)不止一次在抗擊SARS和禽流感的戰(zhàn)斗中嶄露頭角。防控流感大流行，及時(shí)發(fā)現(xiàn)甲型H1N1流感病毒的蹤跡，P3實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的工作，仍是基礎(chǔ)和關(guān)鍵。

　　只有取得特定資格的工作人員，才能打開(kāi)密碼鎖，進(jìn)入P3實(shí)驗(yàn)室。

　　工作人員需依次穿過(guò)一更衣室、二更衣室、緩沖間和準(zhǔn)備間4個(gè)房間，終從頭武裝到腳。在裝戴好頭套、連衣褲的隔離服，口罩和腳套后，才能進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室開(kāi)始工作。

　　隨著深入，氣壓也一層層降了下來(lái)，實(shí)驗(yàn)室里的氣壓就只有50-60帕左右（比正常氣壓低很多）。只有這樣，才能保證里面的風(fēng)不會(huì)往外吹，里面的微生物和病毒，不會(huì)跑到實(shí)驗(yàn)室外。

　　據(jù)李曉丹介紹，檢測(cè)甲型H1N1流感病毒的工作，將從兩方面同時(shí)開(kāi)展：標(biāo)本的一部分用于提取活病毒，留待培養(yǎng)研究。另一部分，則用于分離出病毒中的核酸液，也就是“飽含基因代碼的片段”，需要50微克以上，分裝入試管后，以備進(jìn)一步的檢測(cè)。上海嘉鵬產(chǎn)凝膠成像儀對(duì)檢測(cè)甲型H1N1至關(guān)重要www.623959.com

　　3　檢測(cè)

　　擴(kuò)展基因代碼方便對(duì)比

　　地點(diǎn)：生物防護(hù)二級(jí)實(shí)驗(yàn)室（PCR實(shí)驗(yàn)室）

　　試管中的基因片段隨后將送進(jìn)PCR實(shí)驗(yàn)室。

　　李曉丹說(shuō)，PCR儀是核酸檢測(cè)病毒的關(guān)鍵設(shè)備。近幾天，他們針對(duì)甲型H1N1流感開(kāi)發(fā)的檢測(cè)試劑盒，就將在這個(gè)環(huán)節(jié)發(fā)揮主要作用。

　　實(shí)驗(yàn)人員將試管內(nèi)的一組基因片段放入檢測(cè)試劑配置的反應(yīng)液中，再置于PCR儀下，大概兩個(gè)半小時(shí)左右，每個(gè)基因片段都被放大，生成了大小不一的核酸擴(kuò)展物CDNA（基因片段擴(kuò)展物）。

　　同時(shí)，另一部分通過(guò)反應(yīng)液，被分裝在PCR小試管內(nèi)的核酸RNA（核糖核酸），則可以在特制模板中，通過(guò)與目標(biāo)病毒基因片段的定時(shí)定量比對(duì)，由實(shí)驗(yàn)人員讀出結(jié)果：是否為甲型H1N1流感病毒。

　　李曉丹說(shuō)，為了確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確無(wú)誤差，這個(gè)定時(shí)定量PCR檢測(cè)結(jié)果，只作為整個(gè)甲型H1N1流感病毒追索結(jié)論的一個(gè)參考。
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　　4　確診

　　電泳膠內(nèi)篩顯病毒“原形”

　　地點(diǎn)：生物防護(hù)實(shí)驗(yàn)室（綜合實(shí)驗(yàn)室）

　　裝有不同基因片段擴(kuò)展物的微小試管被送進(jìn)綜合實(shí)驗(yàn)室，這里的關(guān)鍵設(shè)備是盛滿(mǎn)了瓊脂糖凝膠、兩頭插著正負(fù)電極的矩形電泳檢測(cè)儀。

　　利用移液器，實(shí)驗(yàn)人員將試管中微量的無(wú)色透明液體染色后，再放入充了電的膠“池”。

　　在電壓牽引推動(dòng)下，膠池的表面開(kāi)始密集冒起小氣泡，“那是病毒的基因擴(kuò)展物在向另一個(gè)方向走，個(gè)頭大的產(chǎn)物走得慢，越是個(gè)頭小的產(chǎn)物走得越快?！崩顣缘ふf(shuō)，瓊脂糖凝膠電泳儀就像一面篩子，把病毒中每個(gè)基因片段都以特定的“大”、“小”影像顯現(xiàn)出來(lái)。

　　當(dāng)然，上述景象人的肉眼無(wú)法看到。實(shí)驗(yàn)人員讓“膠池”充電40分鐘，確保所有的擴(kuò)展物都“運(yùn)動(dòng)”起來(lái)后，將“膠池”放進(jìn)另一個(gè)特制的方形“鐵柜”中，這其實(shí)是一部紫外線(xiàn)下工作的“照相機(jī)”———凝膠成像儀（上海嘉鵬產(chǎn)）。

　　成像儀內(nèi)，紫外線(xiàn)燈發(fā)光，照射在凝膠上，然后對(duì)膠中染色發(fā)光的擴(kuò)展物自動(dòng)拍照，并輸出在連接的電腦屏幕上。

　　李曉丹介紹，電腦中還能同時(shí)調(diào)出甲型H1N1流感病毒基因序列圖，在同一個(gè)位置上，受檢病毒的數(shù)個(gè)基因片段擴(kuò)展物大小與參照物完全相合，就能夠終判斷，標(biāo)本送檢患者感染了甲型H1N1流感病毒。

　　反之，排除感染可能。

　　李曉丹說(shuō)，從病毒標(biāo)本送至實(shí)驗(yàn)室到終檢測(cè)出結(jié)果，約需4—6小時(shí)。

　　甲型H1N1病毒檢測(cè)程序

　　醫(yī)生對(duì)疑似患者的鼻液或喉液取樣

　　送入流感網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室

　　提取多個(gè)基因片段，對(duì)逐個(gè)基因片段進(jìn)行擴(kuò)展（放大）

　　擴(kuò)展物入膠染色，在紫外線(xiàn)燈下發(fā)光成像

　　與電腦中儲(chǔ)存的目標(biāo)病毒基因片段對(duì)比，同一位置上，大小是否完全一致

　　若一致則能夠終判斷，標(biāo)本送檢患者感染了甲型H1N1流感病毒
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